Document Type : Research Paper
Authors
1 Department of Horticulture and landscaping, Department of Horticulture and landscaping, Faculty of Agriculture, University of Zabol, Zabol, Iran.
2 Department of Horticulture and landscaping, Faculty of Agriculture, University of Zabol, Zabol, Iran.
3 Department of Agriculture and Plant Breeding, Agriculture Institute, Research Institute of Zabol, Zabol, Iran
4 Instructor, Food Industry Group, Faculty of Agriculture, University of Zabol, Zabol, Iran.
Abstract
Keywords
Main Subjects
مقدمه
گیاهان دارویی بخش ضروری مراقبتهای بهداشتی هستند و اکثر مردم در سراسر جهان از آنها جهت درمان مسائل مربوط به سلامت، تسکین درد و رنج بشر بهره میبرند. تقریبا همه جوامع سطح بالایی از وابستگی به گیاهان دارویی دارند (Acharya, 2022). روند رو به افزایش مصرف گیاهان دارویی بهعنوان مواد اولیه تولید داروهای گیاهی بدون توسعه روشهای مناسب کاشت و مدیریت برنامهریزی صحیح پیامدی نگرانکننده، یعنی تخریب طبیعت را دربر خواهد داشت. بدینمنظور تولید گیاهان دارویی چه به صورت خام و یا به شکل فرآوریشده با حفظ کیفیت و استاندارد بالا امری ضروری به نظر میرسد
(Najafi, 2010). بادرنجبویه با نام علمی
Melissa officinalis گیاهی داروئی چندساله از خانواده نعناعیان (Lamiaceae) است (Pressi, 2021). بادرنجبویه گیاهی بوتهای افراشته است که ارتفاع آن به حدود یک متر میرسد. برگها نرم، کرکدار و به طول 2 تا 8 سانتیمتر و به شکل قلب هستند. سطح برگ درشت و دارای رگبرگ عمیق و لبه برگ دندانهدار است. گلها به رنگ سفید یا صورتی کمرنگ متشکل از خوشههای کوچک 4 تا 12 شکوفه در فصل تابستان میباشند. معمولا به دلیل عطر و طعم لیمو مانند آن به عنوان بادرنجبویه شناخته میشوند (Moradkhani, 2010). بادرنجبویه به طور گسترده در شرق آسیا جنوب اروپا و آمریکای شمالی رشد میکند که بهدلیل وجود مقادیر بالای متابولیتهای ثانویه مانند ترکیبات فنولی، فلاونوئیدها و اسانس در اندامهای هوایی گیاهی در صنایع مختلف دارویی، غذایی، آشامیدنی و آرایشی کاربرد فراوان دارد (Hatami et al., 2021).
ترکیب شاخص اسانس بادرنجبویه سیترونلال ترکیبی از دسته ترپنهاست و یک مونوترپنوئید محسوب میشود. یکی دیگر از ترکیبات این گیاه سیترال است که متعلق به ترپنوئیدها است (Rahim Malek & Khorsandi, 2015). متابولیتهای ثانویه دیگری نظیر اوژنول، اکتینول، اکتین، اکتینون، سیترال هگزنول و هارامین به فعالیت قدرتمند اسانس بادرنجبویه کمک میکنند (Hajlaoui et al., 2021). مطالعات بالینی کاربرد بادرنجبویه را جهت درمان تحریکات عصبی و بیخوابی، زونا، آکنه، بیش فعالی، اختلال تمرکز، رفتارهای تکانشی، تبخال عودکننده، دندان قورچه، بیقراری و اختلال خواب در کودکان، عفونتهای پوستی، آرامبخش عصبی در میگرن و همچنین نفخ تایید کردهاند (Ghorbani Ghozhadi et al., 2021). بیوسنتز متابولیتهای ثانویه بهصورت ژنتیکی کنترل میشود ولی ساخت آنها بهشدت توسط عوامل محیطی تحت تأثیر قرار میگیرد
(Omid Beigi, 2000). تولید متابولیتهای ثانویه بهطور طبیعی بسیار ناچیز است (Murthy et al., 2014). یکی از استراتژیهای مهم برای افزایش تولید متابولیتهای ثانویه استفاده از تکنیکهای ویژه نظیر محرکها است (Expósito et al., 2009). محرکهای زیستی محصولات ارگانیک یا معدنی حاوی مواد فعال زیستی و یا میکروارگانیسمها هستند که وقتی روی گیاه یا ریزوسفر اعمال میشوند رشد و بهرهوری گیاه را با بهبود راندمان جذب مواد مغذی، تحمل به تنشهای غیر زیستی و یا کیفیت را تحریک میکنند (Franzoni et al., 2022). بر اساس مقررات اتحادیه اروپا محرک زیستی گیاه، محرکی است که فرآیندهای تغذیه را مستقل از محتوای مواد مغذی محصول تحریک میکند و اهداف آن شامل بهره وری از مواد مغذی، تحمل استرس غیر زنده، بهبود ویژگی های کیفی و در دسترسقراردادن مواد مغذی محدود در ریزوسفر می باشد (Baltazar et al., 2021). محققان اظهار داشتند که محلولپاشی گیاه دارویی علف لیمو با کاراگینان تحت تابش گاما خصوصیات بیوشیمیایی، کیفی و ترکیبات فعال (سیترال و ژرانیول) را به میزان قابل توجهی بهبود میبخشد. استفاده از 80 میلیگرم در لیتر کاراگینان باعث افزایش محتوای اسانس به میزان 9/18و 5/2 درصد، محتوای سیترال 3/7 و 9/8 درصد و محتوای ژرانیول 2/9 و 9/8 درصد در 90 و 120روز پس از کاشت شدند (Singh et al., 2017). کاراگینان جایگزین مناسبی برای کودهای شیمیایی است و بهطور قابل توجهی با افزایش جوانهزنی بذر، سرعت رشد، طول ساقه، تولید گل، رشد ریشه، سرکوب استرس فلزات سنگین و فعالیت ضدمیکروبی در گیاهان مرتبط است (, 2022Hossain & Shourove).
تیمار 200 میکروگرم بر میلیلیتر نانو ذره نقره سنتز سبز از ریشه دو گیاه ریشه طلایی
(Rhodiola imbricate) و پنیرباد
(Withania somnifera) به طور قابل توجهی باعث افزایش شاخص جوانهزنی، تعداد ریشه، طول ساقه، رنگدانههای فتوسنتزی، کلروفیلa، کلروفیل b و کارتنوئید در گیاه جو در مقایسه با تیمار شاهد شد
(Kapoor et al., 2022). مطالعه دیگری در رابطه با تنش خشکی در سه سطح 25، 50 و 100 درصد ظرفیت زراعی و تریکودرما هارزانیوم در سه سطح 5، 10 و 20 درصد روی گل مریم
(Polianthes taberrosel.cv. Doble) نشان داد که تنش خشکی باعث افزایش میزان آنتیاکسیدان و پرولین شده و بر وزن تر و خشک ریشه، پیازچه، محتوای نسبی آب، تعداد برگ و قطر گلچههای باز اثر منفی داشت. اما تریکودرما هارزانیوم تا حد زیادی این اثرات منفی را تعدیل کرد بهطوریکه بیشترین میزان رطوبت نسبی آب برگ (8/5 درصد) در سطح ۱۰ درصد قارچ تریکودرما هارزانیوم و در بقیه صفات بیشترین سطوح در سطح ۲۰ درصد قارچ تریکودرما مشاهده شد (Zekavati et al., 2021).
باتوجهبه اهمیت تولید گیاهان دارویی سالم، توسعه کشاورزی پایدار و تمایل روزافزون جمعیت جهانی به استفاده از گیاهان دارویی، هدف از انجام این تحقیق بررسی تأثیر محرکهای زیستی کاراگینان، تریکودرما هارزانیوم، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره بر خصوصیات مورفوفیزیولوژیکی و فیتوشیمیایی گیاه دارویی بادرنجبویه در شرایط گلخانهای است.
مواد و روشها
مکان و زمان اجرای طرح و نحوه اعمال تیمارها
این آزمایش در سال زراعی 1400-1399 در شرایط گلخانهای و در قالب طرح بلوک کامل تصادفی با ده تیمار و در سه تکرار در شرایط گلخانهای، در شهرستان فریدونکنار اجرا شد. این پژوهش شامل ده تیمار که شامل: کاراگینان 100 پیپیام، کاراگینان 300 پیپیام، کاراگینان 600 پیپیام، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 پیپیام، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 پیپیام، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 پیپیام، تریکودرما هارزانیوم 100 پیپیام، تریکودرما هارزانیوم 200 پیپیام، تریکودرما هارزانیوم 400 پیپیام و آب مقطر (شاهد) بودند که روی گیاه بادرنجبویه اعمال شد. اندازهگیری پارامترهای مورفوفیزیولوژیکی (طول ساقه، وزن تر و خشک شاخساره، وزن تر و خشک ریشه، طول گلآذین و سطح برگ) و فیتوشیمیایی (رنگیزه های فتوسنتزی کلروفیل a، کلروفیل b، آنتوسیانین، کارتنوئید، فنول کل، فلاونوئید کل و فعالیت آنتیاکسیدانی) در مرحله شروع گلدهی انجام شد.
ارزیابی صفات مورفوفیزیولوژیکی
طول ساقه: پنج بوته به طور تصادفی از نزدیک سطح خاک (طوقه گیاه) قطع شده و ارتفاع گیاه از سطح بریدهشده تا انتهای گلآذین به وسیله متر اندازهگیری شد.
وزن تر و خشک شاخساره و ریشه: بعد از اینکه 90 درصد بوتهها وارد فاز گلدهی شدند؛ بوتهها از روی طوقه قطع شده و به آزمایشگاه انتقال یافته به کمک ترازوی دیجیتال با دقت 0001/0 گرم توزین شد. سپس بوتهها در شرایط سایه و دمای معمولی اتاق در جریان هوا خشک شده و وزن خشک بوته به کمک ترازوی دیجیتال با دقت 0001/0 گرم اندازهگیری شد.
تعداد انشعابات جانبی شاخه: تعداد شاخههای فرعی متصل به تنه اصلی در نمونههای برداشتشده (سه گیاه) شمارش شدند.
طول، عرض و سطح برگ: جهت اندازهگیری این پارامترها، ابتدا سطح برگ اسکن شده و سپس توسط نرمافزار دیجیمایزر (Digimizer ver. 793940) مقدار حقیقی سطح برگ سنجش شده و میانگین دادهها به عنوان سطح برگ گزارش شد.
ارزیابی صفات فیتوشیمیایی
سنجش میزان کلروفیل a، b و کارتنوئید
پس از ورود گیاهان به فاز گلدهی، گرم از بافت تازه برگ از هر تکرار با 10میلیلیتر استون 80 درصد سائیده و سپس با سرعت 6000 دور در دقیقه به مدت ده دقیقه سانتریفیوژ شد. برای عصاره فوقانی پس از سانتریفیوژ، میزان کلروفیل a در طیف جذبی 663 نانومتر و کلروفیلb در طیف جذبی 645 نانومتر و کارتنوئید در طیف جذبی 470 نانومتر توسط اسپکتروفتومتر (مدل JENWAY 6300) قرائت شدند. ضمنا دستگاه اسپکتروفتومتر با استون 80 درصد کالیبره شد. غلظت رنگیزهها با استفاده از فرمولهای ذیل و بر حسب میلیگرم بر گرم وزن تر محاسبه شدند (Arnon, 1967).
|
رابطه 1:
|
|
رابطه 2:
|
|
رابطه 3:
رابطه 4: |
|
|
در رابطههای فوق، A میزان جذب قرائتشده توسط دستگاه اسپکتروفتومتر، Chl a مقدار کلروفیل a، Chl b میزان کلروفیل b،Total Chl میزان کلروفیل کل، C میزان کارتنوئید، V حجم نهایی عصارهی استون 80% و W وزن تازه بافت برای عصارهگیری بر حسب میلیگرم است.
سنجش میزان آنتوسیانین
جهت سنجش میزان آنتوسیانین یک گرم از وزن تر با 10 میلیلیتر متانول اسیدی سائیده شد. عصارهها به مدت 24 ساعت در یخچال و در شرایط تاریکی انکوبه شدند. سپس جذب محلول در طول موج 550 نانومتر توسط دستگاه اسپکتروفتومتر قرائت شد. از محلول متانول اسیدی بهعنوان شاهد استفاده شد (Khaleghnezhad et al., 2019).
سنجش میزان فنل کل
ابتدا عصاره متانولی 80 درصد از پودر خشک به روش خیساندن گیاه با نسبت 1:10 تهیه شد. مقادیر ترکیبهای فنولی در عصاره متانولی گیاهی توسط روش Lee et al. (2017) اندازهگیری شد. بر طبق این روش مقدار 2/0میلیلیتر از عصارهها در لولههای آزمایش ریخته شدند و یک میلیلیتر معرف فولین سیوکالتو و 8/0 میلیلیتر کربنات سدیم 7 درصد به مخلوط اضافه شد. بعد از 30 دقیقه نگهداری در دمای محیط جذب نوری آن توسط دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج 765 نانومتر قرائت شد. از غلظتهای مختلف گالیکاسید بهعنوان استاندارد برای رسم منحنی کالیبراسیون استفاده شد. میزان فنول کل بر اساس میزان معادل میلیگرم گالیکاسید در گرم ماده خشک گزارش شد.
سنجش میزان فلاونوئید کل
محتوی فلاونوئیدی عصارهی متانولی بادرنجبویه به روش رنگسنجی آلومینیوم کلراید اندازهگیری شد. در این روش به 5/0 میلیلیتر از عصاره متانولی، 1/0 میلیلیتر کلرید آلومینیوم (10 درصد)، 1/0 میلیلیتر استات پتاسیم یک مولار و 8/2 میلیلیتر آب مقطر اضافه شد. نمونهها به مدت 40 دقیقه در دمای اتاق انکوبه و سپس جذب مخلوط در طول موج 415 نانومتر توسط اسپکتروفتومتر قرائت شدند. ضمنا بلانک محلول نیز بههمینصورت و بدون عصاره آماده شد (Chang et al., 2002). منحنی استاندارد بر اساس محلول غلظتهای متفاوت کوئرستین رسم شده و میزان فلاونوئید معادل میلیگرم کوئرستین در هر گرم وزن خشک گیاه محاسبه شد. تمامی سنجشها در سه تکرار انجام شد.
سنجش میزان آنتیاکسیدان
سنجش فعالیت رادیکالهای آزاد به روش باروس و همکاران صورت گرفت. 250 میکرولیتر از عصاره با 750 میکرولیتر از محلول DPPH (این محلول از انحلال 2 میلیگرم DPPH در 50 میلیلیتر متانول تهیه گردید) مخلوط شد. این نمونهها به مدت 30 دقیقه در شرایط تاریکی و در دمای اتاق انکوبه و سپس میزان جذب آنها در طول موج 517 نانومتر با دستگاه اسپکتروفتومتر قرائت شدند
(Barros et al., 2007). درصد مهار رادیکالهای آزاد با فرمول زیر محاسبه شد:
رابطه 5:
|
درصد مهار رادیکال آزاد |
تجزیه دادهها
دادههای این پژوهش با استفاده از نرمافزار SAS تجزیه شده و مقایسه میانگینها با استفاده از آزمون LSD در سطح احتمال 5 درصد انجام شد. همچنین نمودارهای مورد نیاز با استفاده از نرمافزار اکسل ترسیم شد.
نتایج و بحث
طول، عرض و سطح برگ
نتایج تجزیه واریانس نشان داد که تأثیر سطوح مختلف محلولپاشی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر طول، عرض و سطح برگ در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 1). مقایسه میانگین ها نشان داد که بیشترین طول برگ (3/6 سانتیمتر) از تیمار محلولپاشی با عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره در غلظت 125 پیپیام بهدست آمد. در مقابل کمترین طول برگ (9/3 سانتیمتر) از تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 1). همچنین بیشترین عرض برگ (3/4 سانتیمتر) از تیمار محلولپاشی با 125میلیگرم بر لیتر عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره بهدست آمد که نسبت به تیمار شاهد 61 درصد افزایش نشان داد (شکل 2). مقایسه میانگینهای اثر محرکهای زیستی مورد نظر نشان داد که بیشترین سطح برگ (4/19 سانتیمتر مربع) از محلولپاشی با عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره در غلظت 125 پیپیام و کمترین سطح برگ (4/7 سانتیمتر مربع) از تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 3).
محققان بیان کردند که در برگهای گیاهان تیمارشده با نانو کلات آهن مقدار کلروفیل افزایش مییابد؛ که در نتیجه سبب تولید مواد فتوسنتزی و رشد بیشتر برگها میشوند. نانوذرات به دلیل اندازه کوچکشان به مولکولهای فعال بیولوژیکی متصل میشوند و بهراحتی از غشا سلولی عبور میکنند و بهعلت کوچکبودن وحلالیت بالا، بهسرعت توسط گیاهان جذب شده و در نتیجه سبب افزایش رشد میشوند
(Rasht, 2013).
جدول 1- تجزیه واریانس صفات مورفوفیزیولوژیکی گیاه بادرنجبویه تحت تیمارهای مختلف محرک زیستی.
Table 1. Analysis of variance of morphophysiological traits of lemon balm under different biostimulants treatments.
Sources of variation |
df |
Mean Squares |
||||||||
Leaf length |
Leaf wide |
Leaf area |
Bush height |
Wet weight |
Dry weight |
Lateral branch |
Floresence lenght |
Florescence number |
||
Replication |
2 |
0.29 ns |
0.11ns |
5.99ns |
17.56ns |
737.43 ns |
ns 8.76 |
7.03 ns |
2.75ns |
5.2 ns |
Elicitation |
9 |
1.30* |
0.56* |
30.18* |
306.37* |
76027.20* |
902.13* |
15.21ns |
68.59* |
48.87* |
Error |
18 |
0.078 |
0.025 |
2.043 |
1.18 |
458.07 |
5.55 |
8.1 |
0.27 |
1.94 |
C.V. (%) |
- |
5.46 |
4.53 |
11.46 |
1.18 |
8.33 |
8.20 |
13.32 |
1.56 |
11.23 |
*، ** و ns: بهترتیب به مفهوم تفاوت معنیدار در سطح احتمال 5 و 1 درصد و بدون اختلاف معنیدار می باشد.
*, **, ns: Significantly differences at the 5 and 1% of probability levels, and non-significantly difference, respectively.
نتایج مطالعهای نشان داد که کاربرد نانوذرات نقره سنتزشده با استفاده از صمغ عربی بهطور قابل توجهی جوانهزنی بذر و سیستم آنتیاکسیدانی، طول ساقه، طول ریشه، وزن تر گیاهچه در غلظت 100 پیپیام گیاه شنبلیه، پیاز و ذرت را افزایش داده است. همچنین نانونقره سنتزشده بیان آنزیمهای آنتیاکسیدانی SOD، CAT و APX2 را بهطور قابل توجهی افزایش داد. نانوذرات از طریق ارائهی ریزمغذیها و تنظیم بیان ژن میتوانند در متابولیسم گیاه تأثیر بگذارند (Soliman et al., 2020).
ارتفاع بوته: نتایج تجزیه واریانس دادههای حاصل از آزمایش نشان داد که اثر محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر ارتفاع بوته در سطح احتمال پنج درصد معنیدار بود (جدول 1). بهطوریکه بیشترین ارتفاع بوته (108 سانتیمتر) در تیمار تریکودرما هارزانیوم در غلظت200 میلیگرم در لیتر و کمترین ارتفاع بوته در تیمار شاهد (73 سانتیمتر) مشاهده شد (شکل 4). محققان اذعان کردند که همزیستی قارچ تریکودرما با گیاه ریحان منجر به افزایش ارتفاع بوته شد. آنها علت این امر را کمک تریکودرما به جذب مواد غذایی و تولید ترکیبات شبه اکسینی و جبرلین دانستند که سبب تحریک مکانیسمهای مقاومت، رشد و نمو و افزایش حلالیت عناصر معدنی برای جذب توسط گیاه میشود؛ که با نتایج حاصل از این پژوهش مطابقت داشت
(Salahi Ostad et al., 2020).
وزن تر و خشک بوته: نتایج تجزیه واریانس دادهها بیانگر این بود که اثر تیمار محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر وزن تر بوته در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 1). بیشترین وزن تر بوته (3/509 گرم) در تیمار محلولپاشی با کاراگینان در غلظت 600 میلیگرم در لیتر مشاهده شد که نسبت به تیمار شاهد (8/82گرم) بیش از پنج برابر افزایش داشت (شکل 5). همچنین بیشترین وزن خشک (59 گرم) در محلولپاشی با تیمار کاراگینان در غلظت 600 پیپیام بهدست آمد که نسبت به تیمار شاهد 9/4 برابر افزایش داشت (شکل 6). محققان بیان کردند که کاراگینان جایگزین مناسبی برای کودهای شیمیایی است و بهطور قابل توجهی با جوانهزنی بذر، افزایش رشد، افزایش طول ساقه، تولید گل، رشد ریشه، سرکوب استرس فلزات سنگین و فعالیت ضد میکروبی در گیاهان مرتبط است. جلبک دریایی باعث بهبود کارایی مصرف آب و دریافت مواد مغذی شده در نتیجه باعث افزایش رشد گیاه میشود (Hossain & Shourove, 2022). تیمار کاراگینان در نهالهای برنج (Oryza sativa) سبب افزایش زیستتوده اندام هوایی و ریشه و افزایش بیان ژنهای کدکنندهکینازهای وابسته به سیکلین، آنزیمهای دخیل در سنتز و انتقال اکسین ایندول 3- استیکاسید شد. علاوهبراین سطح رونوشت آنزیمی که تجزیهکردن اکسین را کد میکند کاهش یافت
(Zhang et al., 2014). بنابراین کاراگینان با افزایش فتوسنتز، جذب کربن و نیتروژن، تقسیم سلولی، سطح اکسین و محتوای متابولیتهای ثانویه فعالیتهای ضدبیماریزایی و دارویی را در گیاهان تحریک میکند (Moenne & Gonzalez., 2021). تیمار 80 میلیگرم در لیتر کاراگینان پرتو دیدهشده روی گیاه خاراگوش چینی (Artemisia annua) پارامترهای رشدی نظیر وزن خشک، وزن تر، میزان کلروفیل کل و کارانوئید را افزایش داد (Naeem et al., 2020) که با نتایج این پژوهش مطابقت داشت.
|
|
شکل 1- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر طول برگ بادرنجبویه Figure 1. Comparison of mean effect of different treatments on leaf length of lemon balm |
شکل 2- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر عرض برگ بادرنجبویه Figure 2. Comparison of mean effect of different treatments on leaf wide of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
|
|
شکل 3- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر سطح برگ بادرنجبویه Figure 3. Comparison of mean effect of different treatments on leaf area of lemon balm |
شکل 4- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر ارتفاع بوته بادرنجبویه Figure 4. Comparison of mean effect of different treatments on bush height of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
|
|
شکل 5- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر وزن تر گیاه بادرنجبویه Figure 5. Comparison of mean effect of different treatments on fresh weight of lemon balm |
شکل 6- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر وزن خشک گیاه بادرنجبویه Figure 6. Comparison of mean effect of different treatments on dry weight of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
طول گلآذین: نتایج تجزیه واریانس بیانگر این است که اثر محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانوذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر طول گلآذین بادرنجبویه در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 1). بهطوریکه بیشترین طول گلآذین (3/44سانتیمتر) در تیمار تریکودرما هارزانیوم با غلظت 200 پیپیام و کمترین طول گلآذین در تیمار شاهد (27 سانتیمتر) مشاهده شد (شکل 7). محرکهای زیستی با تنظیم فعالیتهای متابولیکی مختلف مانند فتوسنتز همچنین مسیرهای متابولیکی در جذب نیتروژن و گوگرد رشد را بهبود میبخشند
(Hatami, 2021; Shukla et al., 2016). گزارش شده است که محرکهای زیستی به خودی خود مواد مغذی نیستند در عوض جذب مواد مغذی را تسهیل میکنند (Brown & Saa, 2015). تیمار بوته گوجهفرنگی با قارچ تریکودرما هارزانیوم به صورت محلولپاشی بهطور معنیداری باعث افزایش کلیه پارامترهای رشدی نظیر ارتفاع و وزن خشک اندام هوایی و ریشه در مقایسه با شاهد شد (., 2011Mwangi et al). در مطالعه دیگری گزارش شد که تریکودرما در تعامل با ریشه گیاه و بهبود رفتار کلونیزاسیون ریشه و تولید متابولیت هایی مانند اکسین منجر به افزایش رشد و عملکرد گیاهان می شودVinale, 2008) ).
تعداد شاخههای گلدهنده: نتایج تجزیه واریانس نشان داد که محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر تعداد شاخه گلدهنده گیاه بادرنجبویه در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 1). مقایسه میانگینها نشان داد که تیمار عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره با غلظت 500 پیپیام سبب ظهور بیشترین تعداد شاخه گلدهنده (21 شاخه) شد که نسبت به تیمار شاهد (3/7 شاخه) افزایش سهبرابری داشت (شکل 8). محققان اذعان کردند که محلولپاشی گل گاوزبان اروپایی (Borago officinalis L.) با نانوذرات سبز آهن و نقره سنتزشده در عصاره چای سبز منجر به افزایش پارامترهای مورفولوژیکی نظیر تعداد برگ در بوته و تعداد انشعابات جانبی ساقه شد (Dahmardeh et al., 2018).
کلروفیل a، b و کل: بررسی تغییرات کلروفیل در تیمار محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم نشان داد که تغییرات میزان کلروفیل a، b و کل در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بودند (جدول 2).
|
|
شکل 7- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر طول گلآذین بادرنجبویه Figure 7. Comparison of mean effect of different treatments on floresence lenght of lemon balm |
شکل 8- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر تعداد شاخه گلدهنده بادرنجبویه Figure 8. Comparison of mean effect of different treatments on florescence number of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
جدول 2- تجزیه واریانس صفات فیتوشیمیایی گیاه بادرنجبویه تحت تیمارهای مختلف محرک زیستی.
Table 2. Analysis of variance of phytochemical traits of lemon balm under different biostimulants treatments.
Sources of variation |
df |
Mean Squares |
|||||||
Chlorophyll a |
Chlorophyll b |
Total Chlorophyll |
Anthocyanin |
Cartenoid |
Total phenol |
Total flavonoid |
Antioxidant activity |
||
Replication |
2 |
10.19ns |
10.05ns |
40.23ns |
97.37ns |
0.34ns |
19.09ns |
0.04ns |
10.34ns |
Elicitation |
9 |
260.55* |
218.7* |
854.32* |
1023.9* |
11.81* |
96.76* |
0.31* |
142.62* |
Error |
18 |
2.18 |
0.75 |
2.22 |
26.20 |
0.33 |
8.7 |
0.0175 |
1.47 |
C.V. (%) |
- |
6.59 |
5.37 |
3.86 |
13.08 |
3.004 |
8.33 |
21.13 |
1.77 |
*، ** و ns: بهترتیب به مفهوم تفاوت معنیدار در سطح احتمال 5 و 1 درصد و بدون اختلاف معنیدار می باشد.
*, **, ns: Significantly differences at the 5 and 1% of probability levels, and non-significantly difference, respectively.
به طوریکه بیشترین میزان کلروفیل a (98/31 میلیگرم در گرم ماده تر) در تیمار با کاراگینان در غلظت 100 پیپیام مشاهده شد. درحالیکه کمترین میزان در تیمار شاهد (6/6 میلیگرم در گرم ماده تر) مشاهده شد (شکل 9). در این آزمایش بیشترین میزان کلروفیل b (30 میلیگرم در گرم وزن تر) در تیمار با کاراگینان در غلظت 300 میلیگرم در لیتر بهدست آمد؛ درحالیکه کمترین میزان کلروفیل b (1/5 میلیگرم در گرم وزن تر) در تیمار شاهد مشاهده شد (شکل 10). همچنین تیمار با محرک زیستی کاراگینان در غلظت 300 میلیگرم در میلیلیتر منجر به تجمع بیشترین میزان کلروفیل کل (3/61 میلیگرم در گرم وزن تر) شد؛ درصورتیکه در تیمار شاهد کمترین میزان کلروفیل کل (6/10 میلیگرم در گرم وزن تر) مشاهده شد (شکل 11).
نتایج تحقیقی نشان داد کاراگینان با تأثیر بر محتوای کلروفیل گیاه میزان فتوسنتز را افزایش میدهد .(Khan, 2009) محلولپاشی کاراگینان محتوی کلروفیل، زیستتوده (بیوماس) و فتوسنتز را از طریق افزایش فعالیت فتوسیستم 2 بهبود میبخشد و باعث افزایش آنزیمهای روبیسکو و دیگر آنزیمهای دخیل در متابولیسم پایه مانند گلوتاماتدهیدروژناز، آنزیمهای سنتزکننده (H) NADP، پیرواتدهیدروژناز، ایزوسیتراتدهیدروژناز، گلوکوز 6-فسفاتدهیدروژناز میشود و از این طریق فتوسنتز را بهبود میبخشد (Castro, 2012).
کارتنوئید: نتایج تجزیه واریانس حاکی از آن است که تأثیر سطوح مختلف محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر مقدار کارتنوئید در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 2). مقایسه میانگینها نشان داد که بر اثر محلولپاشی محرکهای زیستی مختلف بیشترین میزان کارتنوئید (6/8 میلیگرم در گرم بافت تر) از تیمار محلولپاشی با عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره در غلظت 125 میلیگرم در لیتر و در مقابل کمترین میزان کارتنوئید (9/2 میلیگرم در گرم وزن تر) در تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 12). نتایج نشان داد که محلولپاشی بابونه کبیر
(Tanacetum parthenium) با نانوذرات سبز نقره سنتزشده در عصاره رزماری منجر به افزایش میزان کارتنوئید شد (Mehdinejad et al., 2019).
شکل 9- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر کلروفیل a بادرنجبویه Figure 9. Comparison of mean effect of different treatments on chlorophyll a of lemon balm |
شکل 10- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر کلروفیل b بادرنجبویه Figure 10. Comparison of mean effect of different treatments on chlorophyll b of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
آنتوسیانین: نتایج تجزیه واریانس دادههای حاصل از آزمایش نشان دادکه تأثیر سطوح مختلف محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر میزان آنتوسیانین در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 2). به طوریکه بیشترین میزان آنتوسیانین (4/80 میلیگرم در گرم وزن تر) در تیمار محلولپاشی تریکودرما هارزانیوم با غلظت 400 میلیگرم در لیتر حاصل شد و کمترین میزان آنتوسیانین (3/15 میلیگرم در گرم وزن تر) در تیمار شاهد مشاهده شد (شکل 13). گروهی از محققین بیان کردند که محتوای رنگدانهها در گوجهفرنگی (Lycopersicum esculentum) در تمام تیمارهای همراه با القاکنندههای شیمیایی (سالسیلیکاسید، اسیدآبسیزیک، سیلیکات پتاسیم) همراه با قارچ تریکودرما هارزانیوم به طور معنیداری افزایش یافت (Adass, 2021). در پژوهشی تجمع پلی فنلها در گیاه گل ساعتی (Passiflora caerulea) در تیمار با تریکودرما هارزانیوم در مقایسه با شاهد افزایش یافت
Şesan, 2020)).
شکل 11- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر کلروفیل کل بادرنجبویه Figure 11. Comparison of mean effect of different treatments on total chlorophyll of lemon balm |
شکل 12- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر کارتنوئید بادرنجبویه Figure 12. Comparison of mean effect of different treatments on carotenoid of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
فنل کل: نتایج تجزیه واریانس نشان دادکه تأثیر سطوح مختلف محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر صفت فنل کل در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 2). بهطوریکه بیشترین میزان فنل (1/41 میلیگرم گالیکاسید بر گرم وزن خشک) در محلولپاشی با تریکودرما هارزانیوم در غلظت 200 میلیگرم بر لیتر و کمترین میزان آن (88/21میلیگرم گالیکاسید بر گرم وزن خشک) در تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 14). محرکهای زیستی با تنظیم فعالیتهای متابولیکی مختلف مانند فتوسنتز و مسیرهای جانبی، تقسیم سلولی، مسیرهای مصنوعی ساخت پورین و پیرمیدین و همچنین مسیرهای متابولیکی در جذب نیتروژن و گوگرد رشد را بهبود میبخشند
(Hatami, 2021 & Shukla et al., 2016).
فلاونوئید: نتایج تجزیه واریانس حاکی از آن است که تأثیر سطوح مختلف محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم در مورد میزان فلاونوئید در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 2). مقایسه میانگینها نشان داد که در اثر محلولپاشی محرکهای زیستی مختلف بیشترین میزان فلاونوئید (4/1معادل میلیگرم کوئرستین بر گرم ماده خشک) از تیمار محلولپاشی با عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره با غلظت 500 میلیگرم در لیتر حاصل شد و در مقابل کمترین میزان فلاونوئید کل (27/0میلیگرم کوئرستین بر گرم ماده خشک) در تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 15). پژوهشگران اذعان کردند که تأثیر نانو نقره سبز سنتزشده در عصاره گیاه رزماری (Salvia rosmarinus) بر صفاتی مانند کربوهیدرات، کلروفیل a، کلروفیل b، فلاونوئید، پرولین و کارتنوئیدگیاه بابونه کبیر اثر معنیداری داشته و علت آن را افزایش فعالیت نیتراتردوکتاز و گلوتاماتدهیدروژناز و در نتیجه افزایش رشد و میزان فتوسنتز دانستند (Mehdinejad et al., 2019).
فعالیت آنتیاکسیدانی: نتایج تجزیه واریانس دادهها بیانگر آن است که تأثیر سطوح مختلف محرکهای زیستی کاراگینان، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره و تریکودرما هارزانیوم بر فعالیت آنتیاکسیدانی عصاره بادرنجبویه در تیمارهای مختلف در سطح احتمال 5 درصد معنیدار بود (جدول 2). بهطوریکه بیشترین میزان فعالیت آنتیاکسیدانی (1/78 درصد مهار رادیکالهای آزاد DPPH) در محلولپاشی با تریکودرما هارزانیوم در غلظت 400 پیپیام و کمترین میزان فعالیت آنتیاکسیدانی (56 درصد مهار رادیکالهای آزاد DPPH) در تیمار شاهد بهدست آمد (شکل 16). محرکهای زیستی مختلف بر مسیرهای بیوسنتز متابولیتهای ثانویه در سلولهای گیاهی تأثیر میگذارند Hatami, 2021)) که وجود این متابولیتهای ثانویه در گیاهان سبب افزایش ظرفیت آنتیاکسیدانی خواهد شد. رشد ریشه از مزایای مشترک گونههای مختلف تریکودرماست که با تولید هورمونهای گیاهی نظیر اکسین، اسیدهارزیانیک و هارزیونالید کنترل میشود (Caei et al., 2013). عصارههای گوجهفرنگی که تحت تیمار تریکودرما قرار گرفتند فعالیت مهارکنندگی بالاتری بر رادیکالهای آزاد DPPH نسبت به شاهد نشان دادندکه بیانکننده فعالیت آنتیاکسیدانی بالاتر عصاره متانولی حاصل از گوجهفرنگی تیمارشده با تریکودرما در مقایسه با شاهد است (Singh, 2013).
شکل 13- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر آنتوسیانین بادرنجبویه Figure 13. Comparison of mean effect of different treatments on anthocyanin of lemon balm |
شکل 14- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر فنل بادرنجبویه Figure 14. Comparison of mean effect of different treatments on phenol of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
نتیجهگیری کلی
نتایج این تحقیق نشان داد که استفاده از محرک زیستی عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره با غلظت 125 پیپیام سبب بهبود ویژگیهای مورفولوژیکی گیاه شد بهطوریکه افزایش 61 درصدی در مقادیر عرض برگ در مقایسه با تیمار شاهد مشاهد شد. همچنین در تیمار کاراگینان 600 پیپیام افزایش 9/4 برابری در مقادیر وزن خشک بوته در مقایسه با تیمار شاهد مشاهده شد. از لحاظ مقادیر آنتوسیانین و ظرفیت آنتیاکسیدانی برگ، تیمار تریکودرما هارزانیوم در غلظت 400 پیپیام بیشتر از سایر تیمارها مؤثر بود.
شکل 15- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر فلاونوئید بادرنجبویه Figure 15. Comparison of mean effect of different treatments on flavonoids of lemon balm |
شکل 16- مقایسه میانگین اثر تیمارهای مختلف بر ظرفیت آنتیاکسیدانی بادرنجبویه Figure 16. Comparison of mean effect of different treatments on antioxidant activity of lemon balm |
کاراگینان 100 (k100)، کاراگینان 300 (k300)، کاراگینان 600 (k600)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 125 (N125)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 250 (N250)، عصاره زعفران محتوی نانو ذرات نقره 500 (N500)، تریکودرما هارزانیوم 100 (T100)، تریکودرما هارزانیوم 200 (T200)، تریکودرما هارزانیوم 400 (T400)، و آب مقطر (شاهد).
REFERENCES
REFERENCES