مؤسسه انتشارات دانشگاه تهران علوم گیاهان زراعی ایران 2008-4811 50 2 2019 06 22 Expression of Schemeric Protein Coding ipaD+stxB in E.coli and Lettuce بیان توالی کدکنندۀ پروتئین شیمریک ipaD-stxB در باکتری E. coli و کاهو 209 221 74189 10.22059/ijfcs.2017.237642.654349 FA زینب چقاکبودی گروه بیوتکنولوژِی دانشکده کشاورزی دانشگاه تهران علیرضا عباسی گروه زراعت و اصلاح نباتاتٍ دانشکده کشاورزی دانشگاه تهران 0000-0003-3598-0419 حسین هنری عضو هیئت علمی دانشگاه امام حسین دیگو اٌرزاز دانشگاه پلی تکنیک والنسیا فریبا ابوئی مهریزی دانشجوی دکتری گروه زراعت و اصلاح نباتاتٍ دانشکده کشاورزی دانشگاه تهران هوشنگ علیزاده گروه زراعت و اصلاح نباتاتٍ دانشکده کشاورزی دانشگاه تهران 0000-0001-8138-0786 Journal Article 2017 07 16 <em>Shigella dysenteriae</em> as the primary cause of epidemic diarrhea have been reported. Shigellosis is an infectious disease caused by Shigella. The IpaD protein is one of the most important virulence factors in Shigella. For production of recombinant protein, coding sequence of ipaD+stxB cloned to pET28(a) exprsson vector and cloned gene confimed  by PCR and restriction enzyme digestions. Coding sequence expressed in E. coli (BL21) was confirmed by SDS-PAGE, ELISA and Western blot. The recombinant protein accounted for about 54.87% of total bacterial proteins. Plant exprssion vector constructed via Golden Braid method. Transient expression of ipaD+stxB in lettuce performed with <em>agrobacterium</em> C58 strain and was confirmed at the level of transcriptome and protein through RT-PCR and ELISA assay. <strong>شیگلوز، یک بیماری عفونی است که توسط شیگلا ایجاد می­شود</strong><strong>.</strong><strong> پروتئین</strong><strong><em>IpaD</em></strong><strong>یکی </strong><strong>از مهم‌ترین عامل‌های بیماری‌زا در شیگلا است. برای تولید پروتئین نوترکیب، توالی کدکنندۀ </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong> </strong><strong>همسانه سازی و  به ناقل بیانی </strong><strong>pET28a</strong><strong>(+)</strong><strong> منتقل و توسط </strong><strong>PCR</strong><strong>و هضم آنزیمی تأیید شد. بیان پروتئین نوترکیب در باکتری </strong><strong>(BL21)</strong><strong><em>E. coli</em></strong><strong> با </strong><strong>SDS-PAGE</strong><strong>، آزمون الایزا و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. در این تحقیق پروتئین نوترکیب حدود 54.87 درصد پروتئین کل باکتری را به خود اختصاص داد</strong><strong>. </strong><strong>ناقل بیانی گیاهی واجد توالی کدکنندۀ </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong> </strong><strong>با روش </strong><strong>Golden Braid 3.0</strong><strong>ساخته و با </strong><strong>کمک اگروباکتریوم سویۀ </strong><strong>C</strong><strong>58</strong><strong> در کاهو به‌صورت موقت بیان شد. بیان پروتئین نوترکیب </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong>در سطح رونویسی (ترانسکریپتوم) با </strong><strong> </strong><strong>q</strong><strong>RT</strong><strong>-</strong><strong>PCR</strong><strong>و</strong><strong>در سطح پروتئین با آزمون الایزا تأیید شد.</strong> https://ijfcs.ut.ac.ir/article_74189_6f64ba651f05e2714936e631ad56c5d4.pdf